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多肽合成相關
蛋白表達相關
抗體制備相關
1、提供哪些多肽定制服務?
三羊開肽可提供優質的多肽合成、快速多肽合成、多肽文庫構建和大規模多肽合成服務。
2、多肽合成使用的是什么辦法?
三羊開肽引進的是國外先進的固相合成技術,可以根據客戶需求進行個性化的多肽定制。
3、最長可以合成多少長度的多肽?
三羊開肽可以合成長達189個氨基酸序列的多肽,可提供毫克級到千克級,純度可達99%。
4、合成一條多肽,常規需要多久時間?
根據多肽序列長度和難易程度的不同,合成時間有所不同。常規多肽合成時間大約為2周。三羊開肽還可以提供快速多肽合成服務,最快可3天交付。
5、多肽采用何種形式發貨?
三羊開肽的多肽以凍干粉形式發貨,一般為灰白色,組成不同,多肽粉末的顏色有差異,儲存在2ml離心管內,同時可按客戶需求進行分裝。
6、產品交付時提供哪些數據報告?
每條多肽均提供MS和HPLC報告。同時,我們還可以根據客戶需求提供溶解度報告及內毒素測試報告。
7、多肽如何儲存?
多肽想長期保存得話需要避光,并應保存在-20度環境內,盡可能地保持多肽穩定性;短期保存可以保存在4度環境內。短期運輸中外界溫度對多肽的有效期和質量不會有影響。
8、多肽合成中如果遇到問題該如何處理?
每條多肽都具有特殊的性質,在合成過程中有時不能達到預期的結果。如果由于一些特殊原因,三羊開肽不能成功交付多肽樣品,技術人員將會及時與您溝通聯系。
1、三羊開肽生物擁有哪些蛋白表達系統?
三羊開肽生物科技有限公司擁有完整的蛋白表達技術平臺:包括原核蛋白表達與純化、酵母蛋白表達與純化、昆蟲細胞蛋白表達與純化、哺乳動物細胞蛋白表達與純化。
2、如何選擇合適的蛋白表達系統?
根據客戶蛋白來源(細菌、動物或其它)和純化蛋白用途的不同,選擇不同的蛋白表達系統。如果不知道該如何選擇,可以咨詢客戶進行推薦。
3、蛋白服務和長鏈多肽服務如何界定?
<50aa一般做多肽合成,>50aa多肽合成困難,可以嘗試表達。
4、哪些因素會影響基因合成和表達的成本?
基因合成成本主要取決于基因的長度和復雜性。表達(蛋白質生產)成本主要受表達系統、目的蛋白質量和純度,以及其他特殊要求如標簽去除,內毒素水平控制,特殊標簽等影響。
5、蛋白表達過程中,雜質有些什么?
雜質大多是細胞內或培養基內的物質,可以通過層析技術去除。
6、蛋白純度最高可以做到多少?蛋白純化后對應純度蛋白應用有哪些?
純度可以達到95%,Biacore和結晶對純度要求較高,一般要求高于90%純度,很難根據純度界定應用。
7、能保證客戶需要的蛋白有活性嗎?
影響蛋白活性的因素有很多,所以無法保證蛋白的活性,但是三羊開肽會通過蛋白分析給出您在表達和純化中的建議,盡量獲得活性蛋白。
8、通常蛋白在什么條件下保存比較好?
將蛋白等量分裝,在-80℃或液氮中長期貯存,并且要避免多次凍融。
1、抗原多肽設計應滿足什么條件?
為了使生產抗體獲得最佳效果,設計應滿足一個基本條件:在免疫過程中,該抗原既不會產生過強的免疫反應,同時又能產生出對感興趣的蛋白有結合能力的抗體。
2、抗原多肽的序列長度是多少才合適?
通常我們會建議序列長度在8-20個氨基酸殘基之間比較適宜,如果太短,就有多肽太特殊、所產生的抗體與天然蛋白之間的親和力(結合能力)不夠強的風險,同樣,如果序列長度超過20,將有可能引入二級結構,所產生的抗體失去特異性的可能,而且肽鏈越長,通常合成難度增大,不易獲得高純度的產品。
3、制備抗體,通常是選擇蛋白的N端還是C端?
為了避免識別區域隱藏在蛋白內部的風險,我們通常建議選擇蛋白的N,C兩端來產生的相應的抗體。因為在完整的蛋白中,N,C兩端通常是暴露在蛋白表面的。然而,一定要注意膜蛋白的C端疏水性太強,不適合作為抗原。
4、可以使用肽抗原作為陽性對照在蛋白質印跡中測試抗血清嗎?
肽抗原(未結合)的分子量 (MW) 太小,無法用于傳統的蛋白質印跡 (WB) 測試。為了驗證 WB 中目標條帶的特異性,建議運行“抗體阻斷”對照,使用肽抗原阻斷一抗。推薦的出血稀釋度為 1:1000(等于 1μg/ml),封閉肽約為 2μg/ml。
5、如果只用一個磷酸殘基制造針對肽的抗體,當它在兩個位點都被磷酸化時,它是否仍能識別該蛋白質?
如果蛋白質在兩個位點都被磷酸化時,單一的磷酸肽抗體可以識別蛋白質。但是,如果蛋白質僅在一個位點被磷酸化時,雙磷酸肽抗體也可以識別蛋白質。因此,很難開發出一種抗體能夠保證蛋白質在兩個位點都被磷酸化時才識別該蛋白質,而在只有一個位點被磷酸化時不結合。
6、如何定義優質抗體?
優質抗體是一種具有適當靈敏度和特異性的抗體,能夠回答您的檢測所提出的問題。但需要注意的是,一種抗體不一定適用于所有應用。
7、載體蛋白交聯的方法是什么?
將載體蛋白加在遠離抗體識別區域的一端,在序列中沒有Cys的情況下在N或C端加上Cys為交聯的首選方法。
8、如何確定是要選擇單克隆抗體還是多克隆抗體?
一般來說,單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低。而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高。與單克隆抗體相比,大量多克隆抗體的生產相對快速且成本低廉,它們是非特異性的,因為它們能夠識別任何一種抗原上的多個表位。
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